Effiziente Probenvorbereitung für Diclofenac-Rückstände

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Die Probentrocknung erfolgte zunächst herkömmlich in einem Techne-Heizsystem unter Zufuhr von Stickstoff. Die Handhabung erwies sich jedoch als umständlich, zeitaufwändig und ergab uneinheitliche Resultate. Der Prozess benötigte ständige Überwachung, da die Proben innerhalb des Heizblockes unterschiedliche Trocknungsraten haben. Die Rekonstitution von Proben mit kleinen Methanolrückständen führte zu nicht vollständiger Derivatisierung oder Reaktionsumkehr.

Alternative Proben-Evaporation

Da die Probenvorbereitung ein Eckpfeiler der Methodenentwicklung ist, sollte sie leicht ausführbar, effektiv und kostengünstig sein und nur minimales Verbrauchsmaterial benötigen, insbesondere dann, wenn sie in Entwicklungsländern eingesetzt werden soll. Essenziell ist zudem die Wiederhol- und Reproduzierbarkeit jedes Schrittes.

Das Mivac-DNA-Concentrator-System (s. Abb. 3) wurde bereits in ähnlichen Anwendungen [9] erfolgreich eingesetzt. Es ist einfach in der Bedienung und zeichnet sich durch eine hohe Trocknungsgeschwindigkeit aus. Das System kann bis zu 44 Proben in 2- oder 4-ml-Vials parallel evaporieren und liefert gleichmäßige Resultate. In allen Fällen wurde ein komplette Probentrocknung ohne Methanolrückstand erreicht. Bei 1 bis 2 ml Lösung benötigte das System für die Trocknung etwa 15 Minuten, bei extrahierten Proben bis zu eine Stunde. Unvollständige Trocknung oder Deriavtisierung und dadurch bedingte abnorme Resultate traten nicht auf. Das Mivac-System trocknet durch Sieden der Proben unter angelegtem Vakuum. Ein Überkochen der Proben und damit Probenverlust und/oder Kontamination wird durch Zentrifugation der Vials in einem massiven Aluminium-Rotor während der Evaporation verhindert. Das System muss nicht beaufsichtigt werden und erfordert keinerlei Verbrauchsmaterial.

Schlussfolgerung

Während der Entwicklung und der anschließenden Validierung dieser Methode wurden etwa 15 000 Proben getrocknet. Der Ersatz des Stickstoff-Blow-Down-Systems durch den Mivac-DNA-Concentrator hat den Probenvorbereitungsprozess und die Methoden-Validierung wesentlich verbessert. Die Analysen von Diclofenac in Federn, Haaren und Nägeln wurden erleichtert und die Resultate zuverlässig dargestellt.

Literatur

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[7] Swarup, D., Patra, R.C., Prakash, V., Cuthbert, R., Das, D., Avari, P., Pain, D.J., Green, R.E., Sharma, A.K., Saini, M. & Taggart, M. 2007, Safety of meloxicam to critically endangered Gyps vultures and other scavenging birds in India, Animal Conservation, 10, p 192 – 198.

[8] Cuthbert, R., Parry-Jones, J., Green, R.E. & Pain, D.J., 2006. NSAIDs and scavenging birds: potential impacts beyond Asia’s critically endangered vultures. Biology Letters, [Online] 22 Feb., 3, p. 91 – 94. Available at: http://rsbl.royalsocietypublishing.org/content/3/1/91 [accessed 21 May 2009].

[9] Goebel, C, 2008, Sample Preparation for the Detection of Synthetic Analogues of Insulin in Human Serum. Laboratory News, January 2008, pp 20.

*N. Richards, S. Hall, Department of Life Sciences, Anglia Ruskin University, Cambridge, CB1 1PT, UK**S. Lancaster, Foundation for Analytical Science & Technology in Africa, Hessle, HU13 0NN, UK***K. Scott, Department of Forensic Medicine and Science, University of Glasgow, Glasgow, G12 8QQ, UK

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