Multiplex-Assay Viabilität und Apoptose in einem Well messen

Promega bietet mit dem neuen Apolive-Glo Multiplex Assay Wissenschaftlern die Möglichkeit, Zellviabilität und Apoptose in einem Well zu messen.

Zwei Parameter zu erfassen, verbessert die Qualität der Daten und reduziert den Zeit- und Kostenaufwand, heißt es aus der Firmenzentrale. Das Assay lässt sich in der Medikamentenentwicklung für die Erstellung von Toxizitätsprofilen einsetzen. Im ersten Schritt des Assays wird die Zellviabilität über eine Messung der Live-cell-Protease-Aktivität bestimmt. Das fluorogene Peptidsubstrat Glycylphenylalanyl-Aminofluorocoumarin (GF-AFC) gelangt durch die Zellmembran in das Zellinnere und wird dort durch die Live-cell-Protease in das fluoreszierende Produkt AFC gespalten. Das Signal ist proportional zur Anzahl lebender Zellen im Ansatz. Im zweiten Schritt wird die Anzahl apoptotischer Zellen direkt nach der Zellviabilitätsmessung über ein luminogenes Caspase-3/7-Substrat ermittelt. Das Substrat wird von aktivierten Caspasen 3/7 in apoptotischen Zellen umgesetzt und dient dann der Hitze-stabilen Ultra-Glo Recombinant Luciferase als Substrat. Das entstehende, sehr stabile lumineszente Signal ist proportional zur Anzahl apoptotischer Zellen.

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