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Next-Generation-Sequencing Schnelle und effiziente Erstellung von NGS-Bibliotheken

Redakteur: Dr. Ilka Ottleben

Für die schnelle und effiziente Erstellung von NGS (Next-Generation-Sequencing)-Bibliotheken hat Merck Millipore die neuen Puregenome Kits und Reagenzien vorgestellt. Diese Reagenziensätze reduzieren die Erstellung von Bibliotheken auf zwei Schritte, die weniger als zwei Stunden in Anspruch nehmen.

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(Bild: Merck Millipore)

Die Bibliothekerstellung mit dem Puregenome Kit ist ein einfacher zweistufiger Prozess mit nachfolgender Amplifikation mit dem Ultra-HiFi KOD Hot Start DNA-Polymerase-Mastermix von Merck Millipore. Diese Polymerase amplifiziert DNA mit hoher Prozessivität in sehr AT- oder GC-reichen Abschnitten, betont der Hersteller. Die Kombination aus effizienter Bibliothekskonstruktion und präziser Amplifikation erziele daher eine maximale Ausbeute mit weniger Ausgangs-DNA und minimalem GC-Bias.

Sequenzdaten von Bibliotheken, die mit den Puregenome NGS-Reagenzien erstellt wurden, sind von höchster Qualität hinsichtlich Phred-Score (Q20 > 85%) und einem höheren Match/Mismatch-Verhältnis. Bessere Sequenzdaten liefern letztendlich aussagekräftigere biologische Ergebnisse, insbesondere bei Anwendungen, die eine hohe Empfindlichkeit und Spezifität erfordern, wie z.B. Genexpressionsanalysen oder Studien zu Einzelnukleotid-Polymorphismen (SNP). Die NGS-Reagenzien wurden für Illumina-plattformkompatible NGS-Bibliotheken validiert, können jedoch auch für andere Plattformen optimiert werden.

Weitere Kits im Puregenome Workflow sind das Puregenome Gewebe-DNA-Extraktionskit, das spezifisch für die Erstellung von NGS-Bibliotheken aus festem Gewebe, biologischen Flüssigkeiten und Zellkulturen validiert wurde, sowie das Puregenome On-Spot Gewebe-DNA-Kit. Dieses dient der Extraktion von DNA aus gezielten Stellen von Gewebeschnitten und ermöglicht eine Analyse extrem kleiner Proben. Das Puregenome NGS-Bibliotheken-Validierungskit ermöglicht eine sehr präzise und kosteneffektive qPCR-Quantifizierung von NGS-Bibliotheken, die mit der Illumina-Plattform kompatibel sind.

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